质谱定量蛋白质组学-iTRAQ

    概述       蛋白质组学(Proteomics)表示“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学是一门以全面的蛋白质性质研究为基础,在蛋白质水平对疾病机理、细胞模式、功能联系等方面进行探索的科学。
      iTRAQ技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation)是近年来由美国应用生物系统公司ABI研发的一种新的蛋白质组学定量研究技术。该技术采用4种或8种同位素编码的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,之后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。
 
技术特点
   可同时标记2~8个样本  标记完全,标记效率高达 97%以上  较高的重复性,能简化谱的复杂程度、提高离子强度  iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白,还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白  可标记修饰后的氨基酸,因此对磷酸化蛋白等翻译后修饰蛋白进行定性定量研究  报告离子的相对分子质量较低(113~121),低分子量区是质谱定性(质量确定)和定量(丰度比较)较为准确的区域,因此质谱检测更为灵敏可靠  
技术流程
   样本经过不同处理后提取蛋白质  蛋白质经过还原,封闭后胰蛋白酶酶切  肽段混合物分别用不同的iTRAQ试剂标记  等量混合各种iTRAQ试剂标记的肽段  MS/MS质谱检测及分析  
技术应用
   同时标记 8 个样品,一次实验实现多达 8 个样品的蛋白质鉴定和定量  可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测  可以分析详细分期/型的临床疾病样本,并可设计样本重复  细胞周期、细胞信号传导整个过程的蛋白质组动态学研究